上海富衡 | 胰酶各身分对细胞的影响

胰酶身分

胰酶主要由胰卵白酶、胰淀粉酶和胰脂肪酶组成。市面上的商品胰酶一般齐会加入EDTA和酚红等身分，但针对不同的情况，有突出的胰酶如去除EDTA和酚红等。

胰酶对细胞的影响

胰卵白酶对细胞的影响

作用机制：胰卵白酶行为一种异种卵白酶，能领受性地水解精氨酸或赖氨酸组成的肽链，将细胞膜上和培养皿联接的卵白质融解，使细胞间的卵白质水解从而使细胞繁芜。

影响因素：胰酶分布细胞的活性与浓度、温度和作用时刻联系。在 pH 为 8.0、温度为 37℃时，胰酶溶液的作用能力强。同期，Ca²⁺、Mg²⁺和血清、卵白质可贬低胰酶的活性。

EDTA 与胰酶的协同作用

EDTA 可络合 Ca²⁺，与胰酶起到协同消化的作用，增多消化效率。但对细胞贴壁性有影响，使用时需严慎。

真贵事项：血清可拒绝胰酶的作用，但不可拒绝 EDTA 的作用。对有些细胞来说，拒绝消化后的离心是必要的。举例，在配制胰酶时加入 EDTA 可提升胰酶消化能力，缩小消化时刻，但要是影响贴壁，在用全齐培养基拒绝消化后，可离心弃上清，再加全齐培养基培养，可去除 EDTA；要是对贴壁没影响，可不离心。在作念细胞凋一火检测时，不妥当用含有 EDTA 的胰酶，不错使用物理设施对细胞进行脱壁管制，因为 Annexin V 常用于细胞凋一火检测，是一种钙离子依赖的卵白，EDTA 会螯合钙离子从而影响 Annexin V，进而影响罢了。

胰酶消化的真贵事项

向培养瓶中加入适量胰酶，轻轻摇晃培养皿使胰酶铺满，真贵不可消化过久，消化过久对细胞无益。消化细胞的操作法子对细胞传代后的景色有很大影响，要是胰酶过量或消化时刻过长，会导致细胞传代后活力缩小或径直导致细胞逝世。是以消化细胞时要严格为止胰酶使用量及消化时刻。

胰酶消化过度的后果及支吾

消化过度

细胞会成片零碎，这是因为胰酶过度消化使得细胞间的聚会被结巴，细胞无法以前贴壁助长。同期，胰酶消化过度会提升细胞的凋一火率，严重影响细胞的活性和生涯景色。

在肿瘤组织原代细胞辞别时，可斟酌使用胶原酶，其对细胞的挫伤更小。胶原酶大意特异性识别并水解胶原卵白，对细胞间质有较好的消化作用，同期对细胞自己影响不大，可使细胞与胶原身分脱离而不受伤害。

胰酶消化时刻长

不错在加入胰酶消化前先用 PBS 冲洗培养瓶。这么不错去除残留的杂质和可能影响胰酶消化成果的物资，提升胰酶消化能力，缩小消化时刻。

不贴壁的情况

关于永恒不贴壁的细胞，可静置 12 小时或更万古刻后不雅察。在此技艺，细胞可能会冉冉妥当环境并驱动贴壁助长。同期，要查验胰酶中是否有 EDTA。要是有 EDTA 且影响贴壁，可重新配制不含 EDTA 的胰酶。关于不贴壁的细胞，也不错相宜缩小胰酶消化时刻或贬低胰酶浓度，幸免消化过度。此外，还不错换用新的培养皿或者培养瓶，确保培养环境干净无混浊。